想要精准诱导RAW2647细胞转变为促炎的M1“战士”或抗炎的M2“修复者”？不要再犹豫了！我们为您提供了一份全面且详细的RAW2647细胞M1/M2极化方案，从试剂配比到具体操作细节，轻松帮助您实现目标。

细胞来源及培养条件

细胞：RAW2647小鼠单核巨噬细胞系。需要注意的是，传代次数不宜过多，建议控制在10代以内。
培养基：高糖DMEM。
血清：胎牛血清(FBS)，推荐使用10%。
抗生素：青霉素-链霉素双抗溶液(1%)。

关键诱导剂与溶剂对照

诱导剂：溶剂对照可以使用PBS或细胞培养基（用于溶解冻干诱导剂的溶剂）。
注意：所有细胞因子及LPS建议分装并在-20℃或-80℃保存，以避免反复冻融。使用前务必在冰上或4℃慢慢溶解，并用预冷的培养基或PBS稀释至工作浓度。

细胞接种与极化培养基更换

（关键步骤）将细胞以2~3x10⁵ cells/孔的密度接种于6孔板中，每孔加入2mL完全培养基。
注意：细胞密度过低可能影响状态，过高则可能导致接触抑制或自发分化。

手动吸弃孔内旧培养基。（可选步骤）可加入1-2mL预热的PBS，轻轻洗涤细胞表面，去除残留血清及代谢废物。

极化培养基的配制

更换极化培养基：
M1组：每孔加入2mL含100ng/mL的LPS和20ng/mL的IFN-γ的完全培养基。
M2组（以M2a为例）：每孔加入2mL含20ng/mL的IL-4和20ng/mL的IL-13（可选）的完全培养基。
对照组1-未处理：仅加入2mL新鲜完全培养基。
对照组2-溶剂对照：加入与诱导剂等体积的溶剂的完全培养基，以排除溶剂本身的影响。

培养与验证极化结果

在37℃、5% CO₂条件下继续培养。24小时是最常用且效果显著的标准时间点。根据具体实验目的（如检测早期/晚期基因及蛋白分泌），可以调整至6、12、48或72小时，但需进行预实验验证。

诱导后24小时，可以通过Western Blot/ELISA（蛋白提取）等方法验证极化表型。
Western Blot：检测iNOS，Arg1，CD206等关键蛋白的表达水平。
ELISA：检测上清液中TNF-α，IL-6（M1），CCL17，CCL22（M2a）等细胞因子的分泌水平。

流式细胞术：使用不含EDTA的胰酶消化（轻柔，时间不宜过长）或细胞刮收集细胞，使用预冷的PBS（含1-2% FBS）洗涤1-2次，重悬于适量缓冲液中染色。
M1表面标志物：CD86，MHC-II等表达上调。
M2表面标志物：CD206，CD163等表达上调。

结论及推荐产品

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